磷脂酶CPLC检测试剂盒可见分光光

磷脂酶C（PLC）检测试剂盒（可见分光光度法）

产品货号：BA

产品规格：50管/48样

产品简介：

磷脂酶C（EC3.1.4.3）是一种水解甘油磷酸酯C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶，广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中，在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。

磷脂酶C催化水解NPPC产生对硝基苯酚，在nm处有特征吸收峰。

产品内容：

需自备的仪器和用品：

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤：

一、酶液提取

1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，g离心5min，取全部上清于4℃、0g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。

2.细胞：按照细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~：1的比例（建议万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后于4℃，g离心5min，取全部上清于4℃、0g离心30min，弃上清，取沉淀溶于1mL试剂一。

3.血清：直接测定。

二、测定操作

三、酶活计算公式

标准曲线：y=0.x-0.，R2=0.

（1）按照蛋白浓度计算

酶活性定义：每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性（nmol/min/mgprot）=（△A+0.）÷0.×V反总÷(V样×Cpr)÷T=17.45×（△A+0.）÷Cpr

（2）按照样本质量计算

酶活性定义：每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性（nmol/min/g鲜重）=（△A+0.）÷0.×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T

=17.45×（△A+0.）÷W

（3）按照细胞数量计算

酶活性定义：每个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性（nmol/min/cell）=（△A+0.）÷0.×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T

=17.45×（△A+0.）÷细胞数量

（4）按照液体体积计算

酶活性定义：每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性（nmol/min/mL）=（△A+0.）÷0.×V反总÷V样÷T=17.45×（△A+0.）

V反总：反应总体积，1mL；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，30min。